檢查安全附件，壓力表、安全閥、排氣嘴、疏水閥、截止閥 必須完好，嚴禁缺件運行。
　　首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。
　　放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。
　　加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以?xún)蓛蓪ΨQ(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。
　　用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗用 1.05kg/cm2，121.3℃，20分鐘滅菌。
　　滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品……
　　將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時(shí)，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(cháng)，即可。
　　注意：
　　鍋內必須在有溶液的情況下，才能打開(kāi)氣閥，不準先開(kāi)汽再 加溶液。聽(tīng)到夾層內水沖擊聲時(shí)，應打開(kāi)鍋底旋塞放去冷凝水。
　　通入蒸汽時(shí)應同時(shí)將放氣嘴打開(kāi)，以便將夾層內冷空氣排出。 待溫度上升較快時(shí)再關(guān)閉放氣嘴。
　　使用完畢后，鍋內壁需刷洗干凈，打開(kāi)排水閥并使鍋轉到原 來(lái)位置，將夾層內的冷凝水放盡。